HPLC有五大系统构成,其中,泵是HPLC的动力系统。液体,只有通过泵的转动而使之流动。因此掌握泵的使用要点对于正确使用HPLC有着至关重要的意义。
1、操作泵之前,用至少两个体积(标准脱气机30mL,对微脱气机10mL)冲洗真空脱气机,特别是当泵关闭了一段时间后(例如:过夜),以及在通道中使用挥发性混合溶剂时,防止溶剂瓶内的玻璃滤头(过滤器)堵塞及长菌,当滤头表面有黑色或黄色污染层说明发生了堵塞,应立即清洗或更换。
2、将装有溶剂瓶的溶剂箱放在泵上面或较高处。当在四元泵上使用盐溶液或有机溶剂时,建议将盐溶液接在下面的梯度阀口上,将有机溶剂接在上面的梯度阀口上,有机溶剂通道建议在水或盐溶液通道的正上面。建议用水定期冲洗所有MCGV通道除去可能在阀口析出的盐结晶。
3、定期检查排液阀的过滤白头。检查方法:拧开排液阀,以水作流动相。
对于标准脱气机(G1322A),流速5ml/min水,若压力大于10bar,则建议更换。
对于微量脱气机(G1379A),流速2ml/min水,若压力大于5bar,则建议更换。
4、当使用低流速时,检查所有1/16英寸接头有无渗漏(用压力测试或漏液测试。每当更换泵密封垫时排液阀虑芯也应更换。
5、更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏,并降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。
6、使用缓冲溶液时,关泵前先用水冲洗系统。当需要长时间使 用0.1摩尔或更高浓度的缓冲液时,建议选用密封垫清洗附件,以减少对密封垫及活塞杆的磨损。
7、如果使用了高浓度的缓冲盐,可以考虑用热水(50-60℃)来冲洗盐通道来确保没有缓冲盐残留在系统中。
8、更换活塞密封垫后应按照密封垫安装步骤对其进行磨合,但磨合不适用于正相密封垫。
9、当泵头安装有柱塞清洗附件时,由于该附件中也有密封垫,这样就会增加活塞杆运动时的阻力。所以开泵前一定要用10%异丙醇,并将其流速调至约2-3滴/分钟使溶液流过冲洗装置。(对于二元泵SL,如果不使用盐溶液可以不开)10%异丙醇有助于降低水的表面张力,并有抑菌作用。不要用其它溶剂代替。
10、当泵头安装有冲洗附件而不开启10%异丙醇,会使密封垫及活塞杆的寿命减短(二元泵SL除外),泵头如果发出“吱吱”声不影响使用和泵的精度如果有必要,可以改变压缩因子(compressibility)来达到更好的效果。