传统检测单糖、双糖的分析方法有化学法、光谱法、GCMS、HPLC等方法。其中化学法无法准确测定单种糖的含量;光 谱法的工作繁琐、误差比较大;GC-MS方法需要进行衍生化反 应,前处理复杂,不利于快速分析;HPLC法虽然相比其他方法灵 敏度好、检测速度快、适用范围广,但也存在检出限较低、抗干 扰能力差,尤其对于食品中低浓度的单糖、双糖很难进行的 测定,无法满足现阶段对食品检测快速、灵敏、准确的要求。LCMS/MS技术通过质谱的高选择性和高灵敏度能够降低目标物的检 出限、提高检测的重现性。
由于糖类为水溶性化合物,在常规的C18色谱柱上没有保留, 而采用其他填料的亲水色谱柱也很难得到太好的峰形或分离度。 因此,选取一款合适的分析糖的色谱柱是液质分析糖的实验关键 点。目前专门测试糖的糖柱通常为液相柱,需要用到100%纯水 相来作为流动相,并且流速通常高于1 mL/min,这样的色谱条件 对于大多数的质谱离子源来说都无法实现化合物的有效离子化, 或者只有通过分流才能实现,但是分流后将损失仪器的检测灵敏 度,失去了使用液质联用仪测试糖的提高灵敏度的目的。
SCIEX 的 LC-MS/MS液质联用系统的一大特点就是强大的 TurboV™离子源技术,离子源的加热能够达到750℃,ESI源耐受流速 范围 5 µL/min~3.0 mL/min,APCI源耐受流速范围50 µL/ min~3.0 mL/ min,因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液质联用仪上进行测试, 即实现了好的分离效果,又提高了检测灵敏度。本实验使用SCIEX Triple Quad™ 4500 质谱系统同时测定梨中的葡萄糖、果糖、蔗糖 和山梨醇四种糖, 实验方法简单、灵敏度高、选择性好。
实验思路 1. 配制果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准曲线,测试四种水溶性 糖的*低检出限; 2. 测试砀山酥梨果实中四种水溶性糖的含量,了解梨中四种糖的 比例关系。
样品处理 1.移取果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇标准品,用纯水稀释,配制 成 50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 µg/mL、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的标准溶液。 2.梨果实中可溶性糖的提取。
梨果实中糖的提取
材料:砀山酥梨(采集于南京农业大学江浦园艺实验站) 将样品去皮削成小块,液氮速冻后储存于-80冰箱。称取2g样 品,加液氮研磨后,加入80%乙醇7 mL混匀。在37℃水浴中恒温 30 min,超声提取15 min,10000 r/min离心15 min。将上清液移 入25 mL容量瓶。重复提取3次,*后加入80%乙醇定容至25 mL。 取2 mL溶液旋转蒸发,用1 mL水溶解蒸干后的固体,溶解时用超 声波处理,尽量溶解完全。溶液离心后,用0.22 µm水系滤膜处 理,即可用于测定。 实验过程中发现此前处理过程提取出的糖样品在液质仪器上 的响应信号过高,*终样品又用纯水稀释10倍和1000倍分别上机 测试。
色谱方法 色谱柱:Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm; 流动相:100%纯水洗脱 流速:1 mL/min; 柱温:85℃; 进样量:10 µL
具体可以到资料下载中心下载,谢谢。