荧光免疫检测原理

荧光免疫检测原理荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点，因此它被用于测量含量很低的生物活性化合物，例如蛋白质（酶、接受体、抗体）、激素（甾族化合物、甲状腺激素、酞激素）、药物及微生物等。荧光免疫检测原理作为免疫分析法的一种，FIA同样存在两种模式，即竞争型和夹心型。其中竞争型（以标记抗原的竞争型为例）的测定原理是基于未标记的抗原（Ag）和标记抗原（Ag-L）竞争结合有限的抗体（Ab）而实现的免疫分析法。检测时，Ab和Ag-L的浓度是固定的。当未标记的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中后，Ag和Ab的结合使得Ag-L与Ab的免疫复合物的量减少。样品中存在的Ag越多，Ab结合的Ag-L便越少，从Ab-Ag-L免疫复合物的减少或游离Ag-L的增加，可以定量测定出样品中待测抗原的含量。其反应过程如下：Ag+Ag-L+Ab≒（Ag：Ab）+（Ag-L：Ab）对夹心型免疫分析来说，其反应原理是在免疫反应的载体上固定过量的Ab，然后加入一定量的Ag，免疫反应后，再加入过量的标记抗体（Ab-L），以形成“三明治”式夹心免疫复合物。样品中存在的Ag越多，结合的Ab-L也越多，夹心免疫复合物的标记荧光信号就越强。反应过程如下：Ab+Ag≒Ab：Ag≒Ab：Ag：Ab-L。