花生粕、豆类粕凯氏定氮测定粗蛋白方法

农作物在人类生活中不可缺少的一部分，为人类饮食健康提供很大的帮助，特点是花生与豆类为人类提供大量能量需求，下面为用凯氏定氮仪测定花生粕和豆类粕粗蛋白含案例提供分享。

免水凯氏定氮仪

用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。

消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。

1 实验材料

1.1 器材

凯氏定氮仪 、石墨消解仪、300ml凯氏烧瓶 4个； 移液管；锥形瓶； 试管； 小玻璃珠

1.2 试剂

98%浓硫酸分析纯；

35％氢氧化钠溶液；

2％硼酸溶液；

标准盐酸溶液(0.01mol／L)。 

粉末硫酸钾—硫酸铜混合物：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。

混合指示剂(田氏指示剂)：由50ml 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。

样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。

2 实验步骤

消化：

取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，浓硫酸5 ml。注意加样品时应直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在通风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。

蒸馏器的洗涤：

用水洗涤干净微量凯氏定氮仪，在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂，用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后，在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶，继续蒸汽洗涤2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶，停止加热，打开夹子。

蒸馏：

设定取30％的氢氧化钠溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸馏水约5ml稀释液，设定蒸馏时间5分钟，开始蒸馏。氨气进入锥形瓶，瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操作。待样品和对照均蒸馏完毕后，同时进行滴定。

滴定：

用0.01mol／L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。 

3 结果计算

其中： A为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数； B为滴定对照液用去的盐酸溶液平均ml数； C为所取样品溶液的ml数。

针对凯式定氮仪有相关案例如果你的实验室刚需要可以与我们一块讨论、分享，关注格丹纳还可以了解以下几种方法哦。

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