说到混合型液相色谱柱,它是一种能够发生多种相互作用模式的色谱柱,作为色谱分离的核心,在目前的液相色谱分析中发挥着重要的作用。混合模式的色谱柱也是种类繁多,有双重混合模式的,也有三重混合模式的。双重混合模式包括:反相+阳离子交换,反相+阴离子交换,反相+HILIC等。三重混合模式包括:反相+阳离子交换+阴离子交换,HILIC+阳离子交换+阴离子交换等。
混合模式色谱柱由于其多种优点,实验人员在分离复杂样品时,越来越多的被使用到实验中,赛默飞拥有的三重混合模式Trinity系列色谱柱在单次运行中可同时分离离子和疏水性分析物,消除了更换色谱柱,使用离子对或使用多种色谱填料的需要。
来来来
我们来隆重介绍一下Acclaim Trinity系列色谱柱。Acclaim Trinity系列均为三重混合模式的色谱柱。又分为P和Q两个系列,均采用纳米微球-硅胶杂化技术,一个颗粒上集成了三种分离模式。P系列色谱柱可以同时分离阳离子、阴离子和非极性化合物。Q系列先卖个关子~
图1. 纳米微球-硅胶杂化技术
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新型Nanopolymer Silica Hybrid(NSH)技术在对以下物质分离时可以获得无可比拟的色谱性能:
01 | 原料药和反离子 |
02 | 药物反离子的筛选 |
03 | 酸性和碱性原料药及各自反离子的混合物 |
04 | 酸性、碱性和中性原料药的混合物 |
图2. Trinity P1柱和Trinity P2柱对比
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使用与维护
当第一次使用新的色谱柱时,在进行任何进样之前,应采用流动相进行彻底冲洗(例如,在推荐的流速,大约使用 20 柱体积)。
当切换到新的流动相时, 确保新的流动相与色谱柱中以前的流动相相容,以避免由于沉淀造成色谱柱堵塞。在进行任何进样(例如 20 个柱体积)之前,应完全调节色谱柱。
使用色谱柱前,需要把系统里置换为含有盐的水相和有机相。保证色谱柱一直在带有缓冲盐的体系下使用,是对色谱柱较好的维护。
色谱柱清洗
对于磷酸盐缓冲液中使用的 3.0 mm 内径色谱柱:
1
在 0.3 mL/min 流速时,使用 5 个柱体积的 20 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色谱柱。
2
在 0.3 mL/min 流速时,使用 20 个柱体积的 100 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 90/10 清洗色谱柱(以强力清除滞留的离子物)。
3
在 0.3 mL/min 流速时,使用 5 个柱体积的 10 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色谱柱。
4
在 0.3 mL/min 流速时,使用 20 个柱体积的 10 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6.4 / 乙腈 v/v 20/80 清洗色谱柱(以强力清除滞留的疏水污染物)。
5
使用至少 20 个柱体积流动相平衡色谱柱。
典型应用
图3. Trinity P1柱分析氯酸盐和高氯酸盐
图4.Trinity P1同时分离药物反离子
图5.Trinity P2柱分析药物相关阴离子和阳离子