激光器
激光器是激光诱导荧光检测器的重要组成部分。
激光作为荧光检测器的理想光源，是因为它具有区别于普通光源的特性：
①单色性好，谱线宽度可达123 9 ’5 以下，使溶剂的瑞利散射光和拉曼散射光的带宽降为1:2’5（拉曼散射光的固有带宽），因而可选择性地消除散射光对荧光信号的干扰。
②聚光性强，激光光束的发散角极小，可将激光束聚焦成直径几微米的光点，能量高度集中，因而可以使液相色谱检测池体积减小，特别适用于目前正在发展的微型和毛细管液相色谱。
③最重要的特性就是光子流量高，也就是亮度高，大大增强了光源的信号，从而显著提高分析灵敏度。
另外，用脉冲激光为光源，采用时间分辨技术可消除瑞利散射光和拉曼散射光对测定的干扰，同时增加被测成分之间测定的选择性。以上这些特性使激光诱导荧光检测器的信噪比大大增强，显示出最高的灵敏度和较好的选择性。
激光器的种类很多，已有数百种材料可以用来制造激光器，如气体、晶体或玻璃、半导体和有机材料等，分别称做气体激光器、固体激光器、半导体激光器和有机染料激光器。此外，利用一定的装置，可以使染料激光器发射出来的激发波长做连续的变化，这种激光器称为可调谐激光器。半导体激光器和有机染料激光器都可用于可调谐激光器。一般激光器仅为线性光谱光源，可调谐激光器因为所发出的激发波长可以连续改变，所以作为光源具有区别于其它激光器的明显优点。激光器按发光方式的不同，可分为连续波和脉冲波激光器。连续波激光器具有良好的空间模式和空间指向性，功率输出变动小于1%，而脉冲波激光器空间模式较差，功率输出变动可达10%以上。
用于液相色谱检测器的激光器的选择主要按以下原则：
①由于大多数激光器的发射光谱仅为一些分立的谱线，激光发射波长必须与所分析组分的吸收光谱相适合。如果需要进行荧光衍生反应，只需选择与荧光衍生试剂吸收相应的激发波长即可对所有组分进行高灵敏检测。此外，在选择激光器时还要考虑溶剂拉曼散射的影响。可通过选择激光器的激发波长或荧光衍生试剂使被测组分的荧光发射避开水的拉曼散射光（水的拉曼散射谱带为270.2nm-322.5nm和606.06nm)。
②激光器要有良好的空间模式和空间指向性。
③激光器要有稳定的功率输出。激光输出功率的稳定性直接影响检测器的灵敏度。输出功率越稳定，检测器的噪声越小，信嗓比越高。
④选择适当功率的激光器。通常，提高激光激发功率，荧光信号和背景噪声都会增强，但荧光强度与激光照射功率成正比，背景短的噪声则与激光照射功率的平方根成正比。因此，从提高信噪比的角度，宜选择功率较大的激光器。但另一方面，随着照射功率的增强又会产生荧光饱和、荧光分子的光解、检测池热效应和基体背景荧光增加等不利因素，不可能无限度提高信噪比。因此必须综合考虑各种因素的影响。
目前，荧光检测器常用的激光器有：He-Cd激光器、Ar离子激光器、Kr离子激光器、He-Ne激光器等。He-Cd连续波激光器是最常用的LIF激光器，它在325nm和442nm处均有很好的荧光衍生试剂与之匹配，但是HE-Cd激光管的寿命较短，输出稳定性受环境影响较大，影响分析检测灵敏度。Ar离子激光器和Kr离子激光器在270nm左右的紫外输出可以使荧光效率很低的分子产生荧光，如某些含芳香环的蛋白质、多肽、氨基酸分子等。但具有紫外输出的激光器体积较大、能耗高，价格昂贵。小功率的Ar离子激光器具有输出功率稳定、体积小、价格较低等特点而被较多的激光诱导荧光检测系统采用，其主要输出波长为488nm和514nm。近年来，He-Ne激光器也常用于荧光检测器中。
半导体激光器又称二极管激光器，由于具有功率输出稳定、价格便宜、体积小、使用寿命长等优点，成为激光诱导荧光检测器的理想光源。近些年来，半导体激光技术得到很大发展。但是，商品半导体激光器的发射波长多在远红外区，最短波长范围在650nm-900nm之间的近红外区。虽然近红外区的背景荧光和拉曼散射的干扰小，样品的光解少，但在此波长范围内，很难找到与其相适合的荧光衍生化试剂，故发展前景不大。目前，生产厂商都在发展紫外半导体激光器，以期得到普遍应用。
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