Agilent高效液相色谱仪标准操作程序
1.目的：建立一个高效液相色谱的标准操作程序。
2.范围：适用于Agilent高效液相的使用。
3.责任：使用Agilent高效液相的化验员。
4.程序
4.1工作环境
实验室温度为20～27℃，温度变化<3℃/hr，相对湿度<80%，液相色谱仪工作台，长2米、宽0.8米、承重大于80公斤，离墙距离0.3米以上。单相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有单独的良好接地。配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。
4.2使用前的准备
4.2.1二次蒸馏水，（建议用0.45微米水相滤膜过滤）；甲醇或乙晴（色谱纯），（建议用0.45微米有机相滤膜过滤）；其他样品所需流动相，（都需经过0.45微米滤膜过滤）。将上述溶剂放入超声波池，除去气泡，方可使用。
4.2.2把流动相放入溶剂瓶中，打开purge阀，单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：5ml/min，单击OK；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击pump control选项，选中ON，单击OK，则系统开始purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续purge，直到所有要用通道无气泡为止；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：1.0ml/min，关闭purge valve。单击pump下的的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的体积，单击OK。
4.2.3进行样品前处理（稀释或溶解至所需浓度）。
4.3实验步骤
4.3.1准备
4.3.1.1开启Agilent 1100LC各模块电源。
4.3.1.2打开计算机，双击online图标。
4.3.1.3从"view"菜单中选择"method and run control"画面，单击"view"菜单中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"标志。
4.3.2数据采集方法编辑
4.3.2.1从“method"菜单中选择"edit entire method"项，选中除"data analysis"外的三项，单击OK，进入下一画面。
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息（如This is for test!），单击OK进入下一画面。
4.3.2.3泵参数设定
在"flow"处输入流量1ml/min，在"solvent"处输入流动相中各溶剂所占的比例，也可"insert"一行"timetable",编辑梯度。在"pressure limits max"处输入柱子的zui大耐高压，以保护柱子，单击OK进入下一画面。
4.3.2.4柱温箱参数设定
在"temperature"下面的方框内输入所需的温度，并选中它点击"more>>"键，如图所示，选中"same as left"使柱温箱的温度左右一致，点击OK进入下一画面。
4.3.2.5 VWD检测器参数设定
在"wavelength"下方的空白处输入所需的检测波长，在"peak width(response time)"下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行，可以输入随时间切换的波长。
4.3.2.6在"run time checklist"中，选中"data acquisition"，单击OK。
4.3.2.7单击“method"菜单，选中"save method as"，输入一方法名，单击OK。
4.3.2.8从"run control"菜单中选择"sample info"选项，输入操作者姓名，在"data file"中选择"manual"或"prefix"。
4.3.2.9从"instrument"菜单中，选择"system on"。
4.3.2.10单击OK，等仪器ready，基线平稳，从"method"菜单中选择"run method"，进样。
4.3.2.11进样时，阀门位置处于"inject"位置，进样针取样量应为所规定体积的三倍，用滤纸拭净针头表面残留液，进样时要轻而快，进样完毕应快速将阀门搬至"load"位置，进样完毕，数分钟后将进样针拔下，阀门回复到"inject"位置。 4.3.3数据分析方法编辑
4.3.3.1从"view"菜单中，单击"data analysis"进入数据分析画面。
4.3.3.2从"file"菜单中选择"load signal"选项，选中您的数据文件，单击OK。
4.3.3.3做谱图优化，从"graphics"菜单中选择"signal options"选项，从"ranges"中选择"auto scale"及合适的显示时间，单击OK，或选择"use ranges"调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4.3.3.4积分
4.3.3.4.1从"integration"中选择"auto integrate"，如积分结果不理想，再从菜单中选择"integration events"选项，选择合适的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。
4.3.3.4.2从"integration"菜单中选择"integrate"选项，则数据被积分。
4.3.3.4.3如积分结果不理想，则重复上两步动作，直到满意为止。
4.3.3.4.4单击左边"√"图标，将积分参数存入方法。
4.3.3.5打印报告
4.3.3.5.1从"report"菜单中选择"specify report"选项，进入。
4.3.3.5.2单击"quantitative results"框中"calculate"右侧的黑三角，选择所需的报告形式，其他选项不变，单击OK。
4.3.3.5.3从"report"菜单中选择"print report"，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击"report"底部的"print"钮。
4.3.4关机
4.3.4.1关机前，先用水和有机溶剂对系统进行梯度冲洗，然后再用有机溶剂冲洗系统，然后关泵（适用于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
4.3.4.2退出化学工作站，及其他窗口。
4.3.4.3关掉Agilent1100电源开关，计算机（用shut down关）。
4.4.1色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死。
4.4.2对于手动进样器，当使用缓冲液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次。
4.4.3流动相使用前必须过滤、超声，不能使用多日存放的纯化水（易长菌），应每天更换纯化水。
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