PCR实验代测,荧光定量PCR代测主要这几点很关键!

来源:网络  作者:网络转载   2019-10-09 阅读:665

PCR实验代测,荧光定量PCR代测主要这几点很关键!


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PCR实验代测,荧光定量PCR代测服实验室试剂的操作:


1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。

3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

4)所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。

6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

Real -Time PCR,即实时监测PCR扩增产物并进行解析的方法,它是在PCR反应体系中加入荧光物质,并通过Real -Time PCR检测系统对PCR反应进程中的荧光信号强度进行实时监测,zui终对实验数据进行分析处理的方法。Real -Time PCR自1996年由美国Applied Biosystems公司推出以来,广泛应用于生物研究的各个领域。目前主要有SYBR Green 染料、Taqman探针法两种。

 


PCR实验代测,荧光定量PCR代测服主要仪器及耗材:


旋涡振荡器 :上海青浦泸西仪器厂产品

手握式电动匀浆机:德国FLUKO 公司产品

低温冷冻离心机:Sigma(3K15)公司产品

Real-time检测仪:ABI (ABI-7300)公司产品

超纯水分离系统:美国LABCONCO公司

离心管及10μL、200μL、1000μL枪头等常规耗材均为国产;RNA提取过程中所需的离心管、枪头等耗材经过0.1%的DEPC水浸泡过夜,121℃灭菌30min,烘干后备用。

 

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