本文讨论了EVOQ LC-TQ在反复进样马血浆样品条件下可 维持的高灵敏度。含有克仑特罗的马血浆样品，去除蛋白 后，未通过分流阀直接注射到系统中（稀释并进样）。对四 条标准曲线进行了分析：开始时一条，每隔100个样品做一 条。结果显示，使用EVOQ LC-TQ测试，在连续两天时间分 布在400个马血浆样品中的四条标准曲线，响应因子的相 对标准偏差（%RSD）成功达到<10%的评判标准，响应因 子的%RSD<5%。
可维持的高灵敏度和高稳定性是实验室定量分析成功与否 的决定性因素。本实验目的是测试布鲁克EVOQ LC-TQ的离子源 设计，对马血浆样品采取稀释后直接进样的方式，没有通 过在线的分流阀。每一个样品进样，离子源都暴露在从柱 子上洗脱出的所有基质中。因为在电喷雾过程中，流动相在 加热的氮气辅助下雾化蒸发，盐、脂质、糖、蛋白质和其他 污染物容易凝聚在离子源内，随着时间的推移导致灵敏度 降低。如果仔细研究离子源内气体流体动力学，设计应避 免凝聚区域和冷却点，并消除气体涡流。采用夹带排空系 统 (主动排空) 可以显著提高离子源的稳定性，同时保持高 灵敏度。通过简单的有机溶剂沉淀除去蛋白后的马血浆样 品被用做基质，用于稀释后进样实验。
实验条件
Sample Preparation 马血浆样品用冷的含酸乙腈沉淀（3:1，v/v），样品离心 10 min，取上清液按体积比1:1用流动相A稀释。 色谱 (Advance™ HPLC)
• 色谱柱: C18, 3 μ, 100x2.1 mm (ACE®, 编号：111-1002)
• 进样体积: 30 μL • 流速: 0.45 mL/min
• 流动相 A: 0.2% 甲酸水溶液
• 流动相 B: 0.2% 甲酸乙腈溶液
• 梯度: • 0.0min 10% B • 0.3min 10% B
• 2.5min 95% B • 2.8min 10% B • 4.5min 10% B 质谱 (EVOQ Elite™)
• VIP-HESI 真空隔层加热电喷雾离子源的加热温度: 300 °C
• 加热气体流量：68 unit • 雾化气流量：90 unit
• 锥孔气温度：300 °C • 锥孔气流量：10 unit
• 喷雾电压：+3500 V • 克伦特罗和克伦特罗D9标记物
• m/z 277.1>168 (CE:25v) • m/z 286.1>204 (CE:12v)
结果和讨论
响应因子是在整个校正范围内，校正品与内标物的峰面积 比（校正/ IS）除以浓度。这是严格的灵敏度检测方法，因为 它考虑到校正曲线上的每一个点。灵敏度的任何下降都将 表现为响应因子较高的%RSD。离子源同时需要稳定性和 持续高灵敏度，从实用角度讲，这一数据的重要性超过一系 列高浓度进样的重复性，而后者在供应商的市场营销文献 中经常出现。 四条校正曲线的响应因子的%RSD小于5%，很好的满足生 物分析方法的验证标准。图1显示了第一和第四校正曲线的 拟合情况，两者差异微不足道，并在整个校正范围内表现出 高灵敏度。
主动排空系统：
主动排空系统在离子源内创造微弱的压 力差，从而引导并消除雾化气和污染物的 涡流。广口排气通道确保迅速清空雾化 气体，保持前面离子取样锥孔的洁净。雾 化气体被夹带在排气系统的气流中，从 LC-MS系统中清除。
表1和2表明，在反复进样血浆样品后，离子源可维持的高灵 敏度性能，这是一个常规生化实验室恶劣环境下的关键需 求。图3显示了所有四条校正曲线中，第一校正水平样品的 色谱图。
结论 ：本实验结果表明，EVOQ LC-TQ连续运行超过48小时（周 末），并成功地分析了五个96孔板的样品，其灵敏度损失微 不足道。主动排空设计使得EVOQ LC-TQ离子源尽管反复 暴露于基质中，仍能保持最高的灵敏度水平，确保在条件苛 刻的定量分析实验室仍能保持稳定的状态。
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