兔子端粒酶(TE)ELISA试剂盒操作步骤
1、编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照2 孔、阳性对照2 孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)。
2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
3、配液:将20倍浓缩洗涤液加蒸馏水至600ml后备用。
4、加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
5、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7、显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟。
8、终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9、测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
保存方法
1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆-----将组织加入适量生li盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。