链霉素ELISA检测试剂盒样本前处理以及注意事项

链霉素ELISA检测试剂盒样本前处理以及注意事项

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：0.05M  PB缓冲液

    称取12.9g Na₂HPO₄·12H₂O和2.175g NaH₂PO₄·2H₂O加去离子水1000ml溶解。

配液2：0.04M磷酸（蜂蜜样品专用）

    1ml浓磷酸加去离子水定溶至360ml。

配液3：1M NaOH（蜂蜜样品专用）

    称取4g NaOH加去离子水定溶至100ml。

配液4：复溶液

    将5×复溶液用去离子水5倍稀释，用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 组织样本

1）称取2±0.05g去除脂肪的匀浆样品，加入8ml 0.05M PB缓冲液，振荡5min，置56℃水浴环境放置30min；

2）室温4000r/min以上离心10min；

3）取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混匀，室温4000r/min以上离心5min；

4）去除上层有机相，取50ul下层液，加入450ul 稀释后的复溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    样本稀释倍数：40     检测下限：4ppb

5.3.2 蜂蜜、蜂王浆

1）称取2±0.05g 样品，加入4ml 0.04M磷酸，振荡至完全溶解，室温4000r/min以上离心5min，直至清亮。（蜂蜜样品可不用离心直接进行第2步）；

2）加入450ul 1M NaOH将PH值调至7-9之间(蜂王浆样品需将全部上清移至另一干净离心管中调节PH值至7-9之间)，室温4000r/min以上离心5min ，直至清亮；

3）取50ul上清液，加入450ul稀释后的复溶液混匀，混合30s；

4）取50ul用于分析。

    样本稀释倍数：20     检测下限：2ppb

5.3.3 牛奶、奶粉

1）称取2±0.05g样品，加入8ml 0.05M PB缓冲液，振荡5min，置56℃水浴环境放置30min；

2）室温4000r/min以上离心10min；

3）去除上层脂肪，取50ul中层澄清液体，加入450ul 稀释后的复溶液，混合30s；

5）取50ul用于分析。

    样本稀释倍数：50     检测下限：5ppb

6 注意事项

6.1 室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

6.2 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

6.3 混合要均匀，洗板要彻底，在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育过程中，用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。

6.5 不要使用过了有效期的试剂盒，不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6.6 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5 ）时，表示试剂可能变质。

6.7 反应终止液有腐蚀性，避免接触皮肤。