介绍ELISA试剂盒组份和操作过程

ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂、结合物和酶的底物等

完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：

1.已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)

2.酶符号的抗原或抗体(结合物)；

3.酶的底物；

4.阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)，参考规范品和操控血清(定量测定中)；

5.结合物及标本的稀释液；

6.洗刷液

7.酶反响停止液。
 
ELISA试剂盒操作步骤：

1. 加规范品：在酶标包被板上设规范品孔，顺次参加不同浓度的规范品50ul(建议每个浓度做2个平行孔)

2. 加样：别离设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品40μl，然后再加样品亲和素10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30倍浓缩洗刷液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5. 洗刷：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：除空白孔外每孔参加酶标试剂50μl。

7. 温育：操作同3。

8. 洗刷：操作同5。

9. 显色：每孔先参加显色剂A50μl，再参加显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 停止：ELISA试剂盒每孔加停止液50μl，停止反响(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。