快速溶剂萃取一超高效液相色谱法分析鱼肉中喹乙醇_行业标准_行业资讯

摘要：以甲醇为溶剂，采用赛默飞ASE加速溶剂萃取仪、高压萃取鱼肉中喹乙醇，并实施了自动在线净化过滤，色谱分析采用了乙醇(色谱级)为流动相，超快速液相色谱法进行分析。喹乙醇的标准工作溶液的线性回归方程为Y=0．0358x+0．0019，相关系数r=0．9999，线性范围为O．1～2．0¨g／mL，方法检出限(以信噪比(s／N=3) 计算)为5．0斗g／kg，样品加标回收率平均值(n=3)为88％，同时对6个平行样进行精密度试验，保留时间与峰面积的RSD值分别为0．21％和2．0％，重现性较好。方法可以用来快速分析鱼肉等样品中的喹乙醇。关键词：快速溶剂萃取；超高效液相色谱；喹乙醇；鱼肉

喹乙醇(Olaquindox)又名喹酰胺醇，属喹恶啉1，4一二氧化物类药物，是一种畜禽及水产动物促生长的药物添加剂，具有抗菌和促生长作用，常被用来添加在饲料中，用于促进禽畜类的生长。但过量使用或不正当使用，会导致喹乙醇在肉制品中残留，在被人食用后，会对人体产生影响，毒理实验研究表明，喹乙醇具光敏毒性、致畸性和致癌性…。目前，常用的分析检测方法是采用超声或振荡提取后净化、过柱嵋J，利用反相液相色谱法分析。前处理提取溶剂通常为乙腈，提取后，用正己烷去除油脂，然后，旋蒸、离心、过滤，定容，待上液相色谱仪进行分离、定量。色谱分析条件常采用甲醇或乙腈作为流动相，C18分离柱，7—8 min分析完毕H1。

本文前处理采用了快速溶剂(ASE)进行加温、加压萃取，大大缩短了提取时间，提高了提取效率，并增加了自动在线净化、过滤等步骤，缩减了提取时间和溶剂消耗，减少了超声提取后后期带来的繁琐手工操作。同时，上机分析采用乙醇为流动相超高效液相色谱法进行分析，目标化合物在1．5 min 出峰，3 min内分析完毕，一方面大大节省了整个分析时间，另一方面也减少了乙腈等有毒溶剂的用量M1。

l 实验部分

1．1试剂与材料甲醇、乙醇、正乙烷(色谱纯)；硅藻土(Dionex 公司)：将硅藻土(75～150斗m)放入马福炉，于 550。C灼烧3 h，移至干燥器中冷却，装入密封容器保存。中性氧化铝：将中性氧化铝(75～150 pan) 放人马福炉，于550℃灼烧3 h。移至干燥器中冷却，装入密封容器保存。喹乙醇标准储备液。其他所用试剂未特别注明均为分析纯。实验用水均为超纯水。

1．2仪器与设备 ASE350快速溶剂萃取仪(Dionex公司)：萃取净化条件见表l。超高效液相色谱仪(Dionex UPLC Ultimate 3000)，液相色谱条件：色谱柱：Acclaim PA2(C18， 2．21zm，2．1×50 IDJn)；流动相：乙醇／lO mmoL乙酸铵(10／90)，O．4 mI．／min，等度；色谱柱温度： 60℃；检波长：380nm；进样量：l灿。．

1．3实验方法标准储备液配制：准确称取适量的喹乙醇标准品，用5％甲醇溶液配成浓度约1 ms／mL的标准储备液。如喹乙醇不溶，可超声使其溶解。喹乙醇标准工作液：将储备液用5％甲醇溶液稀释为含喹乙醇0．1—2．0斗g／mL的标准工作液，存放在冰箱中，避光保存。

样品前处理：将鱼去除鱼鳞和骨头，取出鱼肉用匀浆机打碎，取5．09左右，加人助滤剂5．09，混和后，再加入5．Og中性氧化铝，放入到快速溶剂萃取仪22 mL萃取池中，萃取池底部加入一片纤维素滤膜。按“1．2”中萃取条件经自动萃取净化后，将萃取液旋转至近干，用流动相定容，过0．221LLm针孔滤膜待上机使用。

2结果与讨论

2．1 ASE萃取净化条件选择肉制品或饲料中喹乙醇的提取，通常采用乙腈超声或振荡提取，提取后，一般采用HLB固相萃取小柱净化喹乙醇试样提取液"J，或采用自制的填充的中性氧化铝小柱，过柱净化№】。前者使用HLB SPE小柱，导致分析成本大大增加，且增加了分析时间；后者，由于采用自制填充的小柱等过柱装置，重现性与回收率不能得到很好的保证，且给实验室环境带来一定的污染。因此本文采用了ASE密闭加温加压提取"．8 J，为了避免大量使用乙腈，本文采用了乙醇与甲醇进行替代试验，进行了尝试性分析。按照“1．2”方法对样品进行了提取与在线净化，整个时间缩短至15 rain，提取用试剂(乙醇或甲醇)减少至55 mL，净化用正巴烷减少至25 mL。通过提取后回收率比较发现，使用甲醇提取效率要高于乙醇，达到88％。

2．2色谱条件选择参照国标及相关文献方法【3]，本文采用了乙醇和水为流动相H J，采用UHPLC与亚微米粒径细径柱进行了分析，柱温选择了60℃。选用乙醇代替甲醇或乙腈作为流动相，为了达到色谱的概念，减少有毒试剂的使用。但乙醇的粘度较大，为了降低柱压，及达到快速分离的效果，最后把柱温增加到了60℃，从分离效果来看，与甲醇类似，但峰宽相对变宽。另外，由于该方法有机相比例为 10％，因此，为了保护色谱柱，选用了更亲水的C18 柱一PA2柱，相对普通C18柱，PA2柱上喹乙醇出峰时间更快，峰形更对称。

2．3标准溶液分析按照“1．2”提取方法与“1．3”分析条件，标准溶液色谱图见图1。对标准工作溶液进行线性回归分析，以峰面积Y对浓度髫(斗g／mL)进行回归计算，得到线性回归方程为Y=0．0358x+ 0．0019，相关系数r=0．9999，线性范围为0．1～ 2．0斗g／mL。以信噪比(S／N=3)计算方法检出限为5．ows／kg。