荧光分光光度计测试步骤

来源:网络  作者:网络转载   2019-10-05 阅读:806

  如何正确使用荧光分光光度计来进行测试呢?以下为您详述:

  荧光分光光度计测试步骤

  (一)样品准备

  1.液体样品根据用户提供的技术指标,检查浓度范围是否合适,如果需要稀释,则要考虑所需溶剂类型和稀释倍数。

  2.固体样品均匀粉末、片状或具有光滑平面的块状样品,均可直接测定。

  (二)操作步骤

  1.开机:接通电源,打开主机开关,点燃(打开)光源后,根据说明书要求启动计算机。

  2.检测前准备:参照仪器说明书,在20天内至少进行一次激发校准和发射校准,检测前仪器应预热。

  3.工作条件的选择:环境温度应在20℃±5℃;相对湿度不大于70%;电源稳定,无磁场、电场干扰。根据样品的特性及荧光强度,选择合适的仪器工作条件(如狭缝、PM增益、响应时间等)。

  4.基本测定

  (1)荧光激发光谱测定

  设置仪器参数,扫描发射波长,找到maxλem,以此为发射波长,记录发射强度作为激发波长的函数,便得到激发光谱。

  (2)荧光发射光谱测定

  设置仪器参数,扫描激发波长,找到maxλex,以此为激发波长,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便得到荧光发射光谱。

  (3)差谱测定

  设置仪器参数,选择合适的工作方式,测定背景溶液的发射光谱并储存起来,在一定的工作方式下,扫描样品溶液的发射波长,得到当时的光度值和储存的背景值之间的差示值,即差谱。

  (4)峰面积积分

  选择适当的工作方式,对样品溶液进行积分操作,即得到峰面积积分。

  (5)荧光强度

  选择合适的测量参数,设置λex、λem,采用定点读数或扫描方式,即可测得所选波长处的荧光强度。

  (6)定量测定

  配制一系列已知浓度的标准溶液,在一定的测定条件下,设置λex、λem,按照由稀至浓的次序,测定标准溶液的荧光强度,绘制荧光强度—浓度的工作曲线,不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度,由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

  (三)分析结果的表述

  1.荧光激发光谱、发射光谱以及其他光谱由仪器控制电脑直接绘出。

  2.峰面积积分、荧光强度由仪器控制电脑计算显示。

  3.定量测试:在相同的测定条件下,测定一系列已知浓度的标准溶液的荧光强度,绘制出荧光强度-浓度的工作曲线。浓度未知的溶液的荧光强度测定后,由工作曲线求出该溶液的浓度。

  荧光分光光度计使用注意事项

  1.在实验开始前,应提前打开仪器预热,并配制好所需的溶液,对于已经配制好的溶液,在不用时放在4℃冰箱中保存,放置时间超过一星期的溶液要重新配制。

  2.实验所用的样品池是四面透光的石英池,拿取的时候用手指掐住池体的上角部,不能接触到四个面,清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。

  3.在测试样品时,注意荧光强度范围的设定不要太高,以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。

  4.实验结束后,要及时的清理台面,处理废液,清洗和放置好样品池,将下次要用的溶液放回冰箱,并且按规定登记实验记录,养成良好的实验习惯。

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