高效液相色谱仪操作步骤

　　高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。与经典的液相色谱相比，具有高效液相所用的固定相粒度小（5um-10um）、传质快、柱效高的优势。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80％的有机化合物可以用HPLC来分析测定。

　　高效液相色谱的分离过程HPLC，借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。

　　高效液相色谱仪操作步骤：

　　1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。

　　2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

　　3)打开HPLC工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。

　　4)进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。

　　5)一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。

　　6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。

　　7)设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。

　　8)进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。

　　9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。

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