对二手液相色谱仪的操作要求

　　二手液相色谱仪是一类分离与分析技术，其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中.为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如，纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。

　　对二手液相色谱仪的要求

　　1、流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45μm或更细的膜过滤)。

　　2、流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。

　　3、不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。

　　4、使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20mL以上。

　　5、长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如，甲醇等)，因为，纯水易长霉。

　　6、每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。

　　7、C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。

　　8、堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗，清洗方法：

　　①以异丙醇作溶剂冲洗；

　　②放在异丙醇中间用超声波清洗；

　　③用10％稀硝酸清洗；

　　9、气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。

　　10、如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。

　　11、要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。

　　12、更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，二手液相色谱仪然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。

　　原因有以下三点：

　　（1）流动相过滤在理论上有好处，但是，实际操作时由于不可能做到专瓶专用，反而容易造成的交叉污染，对于配比复杂的流动相影响更大。

　　（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。

　　（3）流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。

　　（4）二手液相色谱仪在实际工作未发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6年时间没有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。