等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。等电聚焦是在电泳介质中放入载体两性电解质,当通以直流电时,载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上,聚焦于一个狭窄区带中的过程。
一、进行等电聚焦电泳必须具备的条件:
1、有一个在电泳条件下基本稳定、重复性良好的pH梯度。
2、有一个抗对流的电泳材料,使已经分离的样品不再重新混合。
3、电泳后有适当的方法来鉴定分离的区带。
二、优点:
1、分辨率高。一般样品不需提纯,可用来测定混合物中某一成分的相对比例。
2、灵敏度高。
3、电泳区带相当狭窄。
4、重复性好。
三、缺点:
1、要求用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀。
2、样品中的成分必须停留在其pI,不适用在pI不溶或发生变性的蛋白质。