高压蒸汽灭菌具有灭菌速度快、效果可靠、温度高、穿透力强等优点，使用不当，可导致灭菌的失败。在灭菌中应注意的几点:
一、消毒物品的初步处理。
凡接触过病原微生物的医疗器械、被单、衣物等均应先用化学消毒剂进行消毒，然后按照常规清洗。特别是传染病房用后的各类物品，要严格把关，先严密消毒后，再清洗、消毒。常规清洗时，先用洗涤剂溶液浸泡擦洗，去除物品上的油污，血垢等污物，然后用流水冲净。有轴节、齿槽和缝隙等器械和其它物品，应尽可能张开或拆卸，进行彻底洗刷。洗涤后的物品应擦干，按各临床需要分类包装，以免再污染。清除污染前、后物品的盛器和运送工具应严格区分，并有明显标志，以防交叉感染。
二、消毒物品的包装和容器要合适。
包装采用双层包布白色棉布，新包布应先洗涤去浆后再使用。物品包装用线绳捆扎，以不松动散开为宜，不宜过紧。使用容器盛装时，选用既可阻挡外界微生物侵入，又有较好的蒸汽穿透性。如特制的注射器灭菌盒、装敷料的贮槽等。民用铝盒因蒸汽难以进入，而盒内的空气又不易排出，按常规灭菌常不能达到灭菌效果。试验对比表明它的污染率大大高于医用铝盒。所以不能使用民用铝盒装注射器或器械灭菌。
三、消毒物品装放应合理。
消毒物品过多或放置不当都可影响灭菌效果。消毒锅内物品不能过挤，不超过锅内容量。尽量将同类物品装一锅内灭菌。若有不同类物品装放一起，应以量难达到灭菌物品所需的温度和时间为准。物品装放时，上下左右均应交叉错开，留出缝隙，使蒸汽容易穿透。大消毒包应立着放上层,小包放下层大搪瓷盒和贮槽也应立着放布类和金属类物品同时灭菌，应将金属类物品包放在下层，使两者受热基本一致，并防金属物品灭菌中产生的冷凝水弄湿包布。
四、排尽空气。
使用高压蒸汽消毒锅时，最关键的是将锅内空气排尽。如锅内有空气，则气压针所指的压强不是饱和蒸汽产生的压强。相同的压强，混有空气的蒸汽其温度低于饱和蒸汽所产生的温度。
五、合理计算灭菌时间。
灭菌时间包括:①穿透时间，从锅内达到灭菌温度开始计算时间，到锅内最难达到的部位也达到此温度的时间;②维持时间，即杀灭微生物所需时间，一般以杀灭嗜热脂肪杆菌芽胞所需时间来表示;③安全时间，为使灭菌得到确切保证所需增加的时间。一般为热死亡时间的一半，其长短视消毒物品而定。对易导热的金属器材的灭菌，不需要安全时间。在灭菌时间内，要注意压力表，及时间调节进气量，以保持在的压力，维持到灭菌时间为止。在灭菌过程中，如有压力、温度下降，应重新升温升压，重新计时。
六、灭菌后。
要求消毒物品干燥后，检查指示剂达到灭菌要求即可出锅。取无菌物品时，要严格无菌操作，开盖物品先将盖盖好，贮槽关闭好通气孔。同时应分类放置，顺序发放取用。超过有效期，炎热潮湿季节一般不超过七天。
七、防止超热蒸汽。
超热蒸汽温度虽高，但象空气一样，遇到消毒物品时不能凝成水，不能释放潜热，所以对灭菌不利。防止超热的办法是使用外源蒸汽灭器时，不要使夹层的温度高于消毒室的温度，两者应相近不要使压力过高的蒸汽进入消毒室内;灭菌时不要用压力高的蒸汽加热到要求温度，然后再降压力。
八、注意安全。
每次灭菌前应检查灭菌器是否处于良好的工作状态，尤其是安全阀是否良好。消毒后减压不可过猛过快。应等压力表归回"0"位时，才可以打开锅门。如果消毒锅内是瓶装溶液，且突然开锅，则玻璃骤然遇到冷空气易发生爆裂，必须注意如果突然把锅门开得太大，冷空气大量进入，易使包布周围蒸汽凝成水点而堵塞包布孔眼,阻碍包布内蒸汽排出，而使物品潮湿。
九、不能使用高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。
消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。危险物品清单:
1、苦味酸和所有易燃易爆的硝基,过氧乙酸，甲烷基，乙基，甲醇，过氧化氢，过氧化物，苯甲酰，苯甲酰基及有机过氧化物。
2、可燃性物质金属锂、钾、钠、黄磷、磷、硫化物、红磷。明胶、碳化钙(电石)、氧化钙(石灰)，镁粉，连二亚硫酸钠(保险粉)。
3、氯化铵和其他氯化物。(粉剂)高氯酸钠，高氯酸铵和其他高氯化物。过氧化钾，过氧化钠，过氧化钡和其他无机过氧化物。亚氯酸钠和其他亚氯化物，次氯酸钙和其他次氯酸物。
4、易燃物质二，醚，汽油，乙醛(醋醛)，氧化丙稀，环氧丙烷，二硫化碳和其他燃点在-30℃~0℃间的物质。甲醇，乙醇，二甲苯，苄基，乙酸苄酯，和其他燃点在0℃~30℃之间的物质(醇类)。灯油，火油，汽油，异戊醇，乙酸(醋酸)，和其他燃点在30℃~65℃之间的类似物质。
5、易燃的气体(氢气，乙炔，次乙基，甲烷)乙烷，丙烷，丁烷和其他在15℃及一个大气压下的气体。
6、含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会腐蚀容器和管道。
7、在打开盖子前，确认压力已归于"0/npa"以下。
8、不要在爆炸性气体附近使用仪器。
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