“膜”法学院之基础篇，如何选择合适的滤膜！

据研究只有10%不到的人真正会用超滤管？

回收效率低下，目标蛋白渗漏...

有的时候真怀疑自己可能用了一个假超滤管。

今天赛多利斯的“膜”法学院就来把超滤管使用过程中的干货仔细筛一筛，助实验室大神一臂之力！

关于“膜” 法学院之基础篇——来自于“爷爷奶奶” 辈的超滤产品

作为世界上个商业化生产膜产品的企业，赛多利斯的膜可是有91年的历史了。赛多利斯的膜源于曾经在赛多利斯公司附近的哥廷根大学任职的诺贝尔化学奖得主Richard Adolf Zsigmondy的发明，和大多数历史悠久的德国产品一样，工艺和质量严谨是赛多利斯秉承多年的家风。那么，关于“膜”，有哪些基本知识是经常被大家忽略的呢？

选对截留分子量，事半功倍

你是否抱怨过超滤管流速慢呢？很有可能是截留分子量选小啦！

超滤膜并非均一孔径的膜，因此超滤膜截留分子量MWCO是标称值，例如对分子量100kD左右的球蛋白截留＞90%的膜而被标称为100kD。所以，如果用标称为100kD的膜去截留我们自己100kD的样品很有可能无法达到较高的截留效果。所以建议大家选择的超滤膜MWCO是需要截留的目标分子量的1/6-1/2。如果首先考虑流速的因素，则选择需要截留的目标分子量的1/2作为膜的截留分子量；如果截留效果作为主要考虑，则选择需要截留的目标分子量的1/5或1/6作为膜的截留分子量。另外，由于膜的特性不一样，更换品牌或是同品牌不同产品系列时，适合的截留分子量偶尔是会变化的！这点一定要多加注意呀！另外，即使是相同的截留分子量，不同的膜的流速是不一样的，所以，选择较高流速的膜，例如PES膜，可以让实验更加轻松。

另外，有小伙伴是做核酸和病毒的，如果想用超滤的方法来浓缩怎么操作呢？这个大可以放心！可以参考下表来进行选择和试验：

值得一提的是：由于PCR技术的发展，即便痕量DNA污染都会导致假阳性的结果，因此在进行核酸操作时推荐大家使用PCR-grade级别的超滤管。

如果需要浓缩病毒，可以参考下表选择超滤产品：

100K、300K的Vivaspin/Vivaflow超滤产品在CAR-T和进行病毒包装的客户中有大量应用呢！

漏蛋白？可能你的样品选错了膜材质

每种膜都有化学兼容性，在使用之前要确认样品成分尤其是样品中的去垢剂是否和膜材质兼容，这样才不会造成样品的泄漏和污染。再比如有的客户样品中含有咪唑，含量为200mM，如果他使用Vivaspin或Vivaspin Turbo可以直接使用，因为Vivaspin或Vivaspin Turbo可以耐受500mM,而他如果选择某些只耐受100mM的超滤管就必须进行稀释，否则就有可能发生泄漏。因此，使用前仔细察看超滤产品的化学兼容性非常重要。

还有就是：

请养成一个好习惯: 超滤结束，等待终的实验结果出来之后再弃去滤出液！

因为如果发生问题，可以对我们可能出现的问题进行分析。

巧用预处理，达到低浓度样品的大回收

如果样品浓度很低，无法做后续分析，这样就需要通过超滤来浓缩样品。Vivaspin采用超低吸附的PES材质滤膜，蛋白回收率高达95%，另外我们还有吸附极低的Hydrosart膜可以选择。对于有些样品含量非常少的情况，除了选择我们吸附量很低的膜，我们还有如下法宝推荐！

a.尽量选择较小的截留分子量的膜

b.选择带有尖角收集器的膜，以便大限度回收样品

c.使用水平转子优于角转子

d.浓缩完用缓冲液清洗多次回收, 注意移液器的枪头不要碰到膜，以免膜破裂。

e.使用前可以先对膜进行“封闭钝化”。

钝化步骤：先用Arium水清洗，用移液器去除残留水分。选择下面推荐的一种钝化液室温至少2小时或过夜浸泡（除了Triton X-100不推荐过夜），去除钝化液，用Arium水冲洗3-4遍。直接使用或4度Arium水保存。

Type Concentration

Powdered milk   1% in Arium water

BSA            1% in PBS

Tween 20       5% in Arium water

SDS            5% in Arium water

Triton X-100     5% in Arium water

PEG 3000       5% in Arium water

Table 1: 封闭液

Vivaspin超滤管系列具有的尖角死体积样品安全保护技术，防意外甩干，给珍贵的样品更多一道保障！另外，根据蛋白的分子量和体积的不同，Vivaspin系列有多达24种不同选择。样品处理体积包括从100μl到20ml，截留分子量也涵盖了2KDa到0.2um。