细胞凋亡(apoptosis)是一种基本生物学现象,指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,在多细胞生物去除不需要的或异常的细胞中起着必要的作用。在正常活细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜的内侧,而在细胞凋亡的早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。膜联蛋白V(Annexin V) 是一种分子量为35~36KDa的钙离子依赖型磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。通过AbFluorTM 488标记Annexin V即可简单快速地直接检测出细胞早期凋亡情况(绿色荧光)。
碘化丙啶(propidine iodide,PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,而早期凋亡细胞的细胞膜是完好的,对PI有拒染性。但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能透过细胞膜而使细胞核染上。
使用AbFluo™ 488和碘化丙啶(PI)对细胞进行染色可以区分完整细胞,早期凋亡和晚期凋亡或坏死细胞。有关详细信息,请参阅下面的列表。
产品名称 | 货号 | 激发光与发射光 |
Annexin V-AbFluor™ 488 Apoptosis Detection kit | KTA0002 | Ex/Em = 491/517 nm |
* PI:Ex/Em = 535/617 nm (DNA) Abbkine使用的AbFluor™ 染料,针对Annexin V研发了多种偶联产物。AbFluor™染料与其它荧光标记染料相比,如FITC,TRITC,Cy®染料,AlexaFluor®和Dylight®标记染料,具有相同或更好的标记性能和荧光表现(荧光亮度,耐光性),特别适用于体内成像和流式细胞术。
以Annexin V-AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒为例:
使用喜树碱(camptothecin)诱导Hela细胞凋亡(24h),使用Annexin V- AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒进行染色。图中展示的是晚期凋亡/坏死细胞。(绿色为细胞膜,红色为细胞核) | |
使用喜树碱(camptothecin)诱导Hela细胞凋亡(24h)。 使用Annexin V- AbFluor™ 488 细胞凋亡检测试剂盒进行染色,可以区分早期凋亡细胞 (Annexin V- AbFluor™ 488 阳性), 晚期凋亡或坏死细胞 (Annexin V- AbFluor™ 488 与PI 均为阳性), 和活细胞 (未染色).
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- Annexin V细胞凋亡检测试剂盒常见问题:
- 1.Abbkine Annexin V细胞凋亡检测试剂盒可以检测人类以外动物的细胞凋亡吗?
答:当然。因为试剂盒原理是Annexin V与磷脂酰丝氨酸(PS)亲和,而PS在不同物种之间没有差异。
- 2.胰酶对贴壁细胞的影响?
答:胰酶对细胞膜有一定的损伤,但用低浓度胰酶消化, 轻柔吹打贴壁细胞 2~ 3 次, 离心机 4℃, 300g, 5min 离心,处理得当的话, 胰酶造成的损伤可以控制在 5%以内, 有对照组的情况下对实验结果不会造成明显影响。
- 3.为什么只能用不含 EDTA 的胰酶消化贴壁细胞?
答:Annexin V 是 Ca 依赖性蛋白, 所以不能加入 EDTA, 防止 EDTA 螯合了 Ca 离子从而影响 Annexin V, 进而影响结果。
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