什么样的标签适合用于免疫沉淀呢?
His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小,并且较容易分离和纯化,His-tag 融合标签与其他标签相比有很多明显优势, 是目前用于纯化的融合标签中使用为广泛的一种。His抗体也常用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。
为什么推荐使用His标签抗体偶联的琼脂糖/磁珠?
与使用Protein A/G琼脂糖的传统免疫沉淀(IP)方法相比,Abbkine的琼脂糖/磁珠偶联标签抗体,省去了Protein A/G与抗原-抗体复合物结合的步骤。偶联抗体直接和目标蛋白结合后,通过离心或使用磁力架,将目标蛋白从细胞裂解液中分离出来。不仅让实验变得简单快捷,更可以避免非特异性结合,降低背景。表位标记蛋白的免疫沉淀可用于确定蛋白的细胞定位、研究翻译后修饰或检测标记蛋白与其它蛋白之间的相互作用。
- 看到这里,您肯定会问,Protein A/G的缺点是什么?
- 1.耗时:使用Protein A/G需要额外的孵育与洗涤操作
- 2.效果差:当抗体种属、亚型和ProteinA/G不匹配时,ProteinA/G和抗体结合能力弱
- 3.背景高:和样本中的其他免疫球蛋白结合,产生非特异性结合,导致高背景。
这就是艾美捷科技为您推荐琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体的原因:
产品名称 | 货号 | 应用 |
Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, 琼脂糖 | A02050AGB | IP |
Anti-His Tag Mouse Monoclonal Antibody, 磁珠 | A02050MGB | IP |
琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体,优势更加突出:
- 高特异性—高特异性单克隆标签抗体可实现高产量和高纯度免疫沉淀
- 低背景—稳定、预封闭的填料及特异性抗体减少了免疫沉淀过程中的非特异性结合
- 规格灵活:100ul, 400ul, 2ml,多规格可供选择。满足不同规模的免疫沉淀需求
- 操作方便—产品说明书提供了免疫沉淀优化方案,一次免疫沉淀时间约1 - 2小时
- 兼容性强—填料可以兼容手动及自动化操作
琼脂糖/磁珠偶联His标签抗体使用说明:
- * 琼脂糖微球是多孔的,这使得它们具有高的表面积与蛋白质相互接触,并可以容纳大量的液体。在纯化大量蛋白的时候,传统的琼脂糖微球偶联抗体是IP实验的选择。(琼脂糖:每个样品加入20ul悬液)
- * 在IP实验中,由于所有的相互作用均发生在磁珠的外表面,并且磁珠的尺寸更均一,所以磁珠的可重复性和纯度通常高于琼脂糖。磁性分离不需要离心和多次洗涤,且孵育时间短,在日常小规模、快速处理多个样品的IP实验时,磁珠偶联抗体更简单、更快速。(磁珠:每个样品加入10-20ul悬液)
- * 提供形式:液体(抗体-琼脂糖/磁珠复合物:保护液=1:1,50%的悬浮液)
- * 储存方式:4°C可保存一年,琼脂糖偶联标签抗体避免冻融和涡旋;磁珠偶联标签抗体避免冻融和离心