DNAMarker的选购与问题解答

来源:网络  作者:网络转载   2019-10-10 阅读:245

一、novoprotein DNA Marker特点:

  • 每个条带均为单独定量制备
  • 可以用于 DNA段大小和浓度的判断
  • 带型清晰明亮、条带大小准确,覆盖范围广(100bp-10kb)
  • 明暗条带优化比例,条带更美观
  • 内含上样缓冲液和指示染料可直接上样、快捷方便
  • 添加了特定稳定剂,稳定性高,于-20℃可保存两年以上
  • 适用于 TAE 和 TBE缓冲体系
  • 可以任选指定条带定制DIY DNA Marker
  • 价格优势明显
     

二、如何选择novoprotein DNA Marker
如图为novoprotein 在售的18种DNA Marker,可以根据您的目的片段大小,选择附近条带较密的marker,这样对目标片段大小的估计较准确。两个不同目的带同时电泳时,尽量选择同时可以标定两个目的片段的marker。如果您的实验有特殊条带需求,我们还可以为您提供DIY DNA Marker定制服务。
 


(DNA Marker电泳图)


三、novoprotein DNA Marker使用方法及注意事项

使用注意事项:

  • 建议选择合适浓度的琼脂糖凝胶(DNA段越短胶浓度越大:<0.5k,胶浓度1.2-1.5%;>10kb浓度,0.3-0.7%;0.5<DNA<10kb,胶浓度为0.8-1.0%)
  • DNA Marker使用前彻底化冻并混合均匀
  • 取5 μl直接加入琼脂糖凝胶的加样孔中(约每1 mm点样孔宽度加1 μl)进行电泳
  • 低电压下不受场强影响,分离效果好。一般电压4-10v/cm,大片段电泳时注意控制电压。
  •  及时更换电泳缓冲液

保存注意事项:

4℃保存3个月以上,-20℃保存2年。(如客户电泳使用频繁可于室温随时使用,但我们推荐客户于4℃存放)
DNA Marker 加样时尽量使用新枪头,避免核酸酶污染

四、DNA Marker使用问题解析

  • 条带模糊 

原因

解决方案

凝胶浓度不合适 

根据片段长短选择合适的凝胶浓度

电泳缓冲液缓冲能力差 

反复使用后缓冲能力下降需及时更换

电压过高时间过长

电压不应该超过20V/cm,电泳温度应该低于30℃

上样量过多  

减少上样量以marker条带为准条带更清晰

电泳胶质量不好

选择好胶粉充分溶胶

Marker降解

防止核酸酶污染,确保保存温度和时间


  • 亮度不够或不均一

原因

解决方案

上样量少

可适度增加上样量

EB浓度低

按照要求加入EB,一般为终浓度0.5-1ug/ml

凝胶不均匀,胶质过厚

充分煮胶至透明无杂质和丝状物,倒胶均匀适量

电泳胶亮度不均一

电泳时间过长时,琼脂糖胶前部EB会迁移至胶后部,造成前后DNA染色亮度不一,可在电泳开始前,在琼脂糖胶前部,靠近电泳槽阳极附近加入少量EB并混匀。


  • 条带污染

原因

解决方案

污染核酸外切酶至DNA降解

使用灭菌的枪头,及时盖紧管盖

点样时污染

加样时及时更换枪头

 

五、Marker条带比较分析

对市场上热销DNA Ladder 2000同类型产品调查对比见下表:


公司名称

次数

目录价

定量条带(标称)

普通条带(标称)

备注

Takara

40

85

30ng/ul

10ng/ul

5ul电泳,亮带150ng,其余50ng

康为世纪

50

48

30ng/ul

10ng/ul

5ul电泳,亮带150ng,其余50ng

东盛

60

90

30ng/ul

15ng/ul

5ul电泳,亮带150ng,其余75ng

SinoBio

50

70

20ng/ul

10ng/ul

5ul电泳,亮带100ng,其余50ng

全式金

50

70

20ng/ul

10ng/ul

5ul电泳,亮带100ng,其余50ng

天根

50

90

17ng/ul

8ng/ul

6ul电泳,亮带100ng,其余50ng

 

由表中可以看出,我们的marker浓度在市场上位于中等水平,从价格来看也比较有优势,且我们的活动力度较大。(目前marker产品,买二送二

为了取得美观的DNA Marker电泳分布图谱,我们在产品制备过程小幅度调整了非定量条带的浓度,结果使定量条带更醒目,相对其他条带更易区分。


  • Marker条带电泳图谱比较

 

  • Novoprotein新产品DNA Ladder 2000 plus II
  • 2、Novoprotein DNA Ladder 2000
  • 3、T 1公司同类型 Marker DL2000
  • 4、T 2公司同类型 Marker D2000


 

 

 




(1%琼脂糖胶,2ul电泳可见novoprotein DNA marker条带清楚,带型美观。)

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