反向色谱柱在经过出厂测试后是保存在甲醇（或乙腈）/水中的。请一定确保您所使用的活动相和甲醇（或乙腈）/水互溶，由于色谱柱在运输过程中可能会干掉，因此在用活动相分析样品之前，应使用分10-20倍的体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱：假如您所使用的活动相中含有缓冲盐，应留意用含水量很高（约95%）的活动相过渡，样品分析完后，冲洗柱子是亦然。过往传统的方法使用纯水冲洗，对于非极性柱，如C8或C18，由于纯水不能浸润填料表面而冲倒碳链，造成柱效下降。另外，分析样品时，由于纯水在填料表面不能浸润形成水膜，出现样品不保存而分不开，重现性差，所以对于一般的C18或C8，有机溶剂不能低于5%。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。假如该色谱柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活动相，请在使用活动相之前用乙醇或异丙醇平衡。
如何平衡色谱柱：
平衡过程中，将流速缓慢地进步用活动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度假如较低，则需要较长的时间平衡）。
色谱柱的再生
建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱规格 柱体积 溶剂体积
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
请根据下表选择您的再生方法:
极性固定相(如Si，NH2，Diol色谱填料)的再生：正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水 非极性固定相（如反向填料C18，C8等）的再生：水—乙腈—氯仿（或异丙醇）—乙腈—水
色谱柱的维护
1、使用保护柱
2、大多数柱的PH稳定范围是2-7.5，尽可能在此范围内使用
3、避免活动相组成及极性有剧烈变化
4、活动相使用前必须经脱气和过滤处理
5、假如使用极性或离子性的缓冲溶液作活动相，要在实验完毕将柱子冲洗干净
6、压力升高时更换保护柱
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