Tris-HCl缓冲液在蛋白纯化中的控制条件

我们知道生物缓冲液在蛋白纯化过程中有着多方面的作用，挑选合适的缓冲液对实验至关重要，那是不是挑选好缓冲液就足够了呢？并不是，这里以常用的Tris-HCl缓冲液举例说明其在蛋白纯化中受影响的控制条件。

Tris具有离子强度低，是蛋白的良好溶剂，同时具有缓冲能力强，缓冲范围接近生理pH等优点，这也是Tris-HCl经常作为蛋白纯化缓冲液的原因。仅仅只是用Tris-HCl缓冲液还不能保证蛋白纯化的效果，还需要控制好实验过程中缓冲液的各种条件。

Tris-HCl缓冲剂的浓度

蛋白纯化实验中确定了缓冲液的pH值，确定了Tris-HCl的缓冲体系，就可以知道它在设定的pH上确实是具有缓冲作用（一般缓冲剂解离常数pKa在设定pH值上下一个单位内具有缓冲作用）。光缓冲范围和解离常数复合还不够，另外还需要确保Tris-HCl的浓度足够高才能达到实际缓冲液的作用，一般选择的浓度是20-100mM。

Tris-HCl缓冲液对温度敏感

Tris的缓冲体系对温度都比较敏感，比如在25℃时将Tris-HCl调至pH为8，pH值将在5℃时增加到8.58而在37℃时降到7.71。因此在4℃条件下保存蛋白或在37℃进行实验，就应该考虑到室温下调的pH值可能在实验条件中就可能不适用。

Tris-HCl缓冲液中的盐

蛋白纯化实验的Tris-HCl缓冲液与其它实验还有区别，需要添加NaCl以提高离子强度（盐浓度），以帮助保持蛋白的可溶性和模拟生理条件，一般常用浓度150 mM。离子交换层析进行蛋白纯化开始需降低盐浓度减少竞争，凝胶过滤柱和Ni2+ 亲和层析柱则坑需要提高浓度。

缓冲液体系不能影响蛋白的活性，Tris-HCl中不能含有磷酸盐，否则会抑制某些蛋白（激酶）的活性，反应前应彻底透析掉。德晟有着多年生产生物缓冲剂的经验，可大量提供Tris、Bicine、MOPS等缓冲剂。