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检测荧光的仪器:分子荧光光谱仪又称荧光分光光度计有的场合也叫荧光光谱仪,是一种定性、定量的仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定,不但可以做一般的定量, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化 从而阐明分子结构与功能之间的关系。荧光分光光度计的激发波长扫描范围一般是240~1000nm,发射波长扫描范围是200~900nm。可扩展至1700nm或更远。可用于液体、固体样品(如凝胶条)的光谱扫描。
荧光分光光度计结构示意图
荧光分光光度计的检测原理是分子发光包括荧光、磷光、化学发光、生物发光和散射光谱等。基于化合物的荧光测量而建立起来的方法称为分子荧光光谱法。由光源发出的光通过切光器使其变成断续之光,通过激发光单色器变成单色光,此光即为荧光物质的激发光。被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪。一个激发,一个发射,采用双单色器系统,可分别测量激发光谱和荧光光谱。
荧光法是测定物质吸收了一定频率的光以后,物质本身所发射的光的强度。物质吸收的光,称为激发光;物质受激后所发射的光,称为发射光或荧光。如果将激发光用单色器分光后,连续测定相应的荧光的强度所得到的曲线,称为该荧光物质的激发光谱 。 实际上荧光物质的激发光谱就是它的吸收光谱。在激发光谱中吸收处的波长处,固定波长和强度,检测物质所发射的荧光的波长和强度,所得到的曲线称为该物质的荧光发射光谱,简称荧光光谱 。在建立荧光法时,需根据荧光光谱来选择适当的测定波长。激发光谱和荧光光谱是荧光物质定性的依据。某些物质的分子能吸收能里而发射出荧光,根据荧光的光谱和荧光强度,对物质进行定性或定里的方法,称为荧光法。对于某一荧光物质的稀溶液,在一定波长和一定强度的入射光照射下,当液层的厚度不变时,所发生的荧光强度和该溶液的浓度成正比,这是荧光定量的基础。
应用范围:
生态地质研究:使用“荧光标记”方法对水文地质过程进行研究。港口,河流和水库水域油
品的污染源;外部因素对天然水体中油品生物降解过程的研究;水库生物活性对叶绿素荧光
的研究;
生物应用:包括:核酸研究,如和 RNA、蛋白质研究、酶动力学、细胞研究,包括细胞内离子测定;
科学研究:测量发光光谱特性,研究有机和无机发光物质,发光标签,嵌入生物物体中;
法医检查:油墨,纸张等的光谱特性对象,荧光粉,其他发光粉末的光谱纯度;
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